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我们可以看出,LB组,(MMT/HA-TEC)10组和高压蒸气杀菌组细胞外液导电率均随着时间的延长而降低。
然而在相同时间点,(MMT/HA-TEC)10组细胞外液导电率均显著小于LB组,差别有统计学意义(P
结果表明,(MMT/HA-TEC)10多层膜提取液以及经过高压蒸气杀菌后获取的提取液均对金葡菌细胞膜有显著的损害作用。
真菌细胞膜显存在丰富的蛋白质,同理,当细胞膜的结构完整性遭到破坏以后,蛋白质大分子会扩散到细胞外液中。
我们发觉,随着时间的下降,三组细胞外液中的蛋白质纯度都有不同程度的降低。
类似的是,(MMT/HA-TEC)10细胞外液中蛋白质浓度显著小于LB组,差别有统计学意义(P
通过抗菌疗效测试,我们直观地认识到(MMT/HA-TEC)10多层膜提取液对金葡菌的杀灭疗效。
通过真菌培养实验可以看出,在共培养10h以后,LB组金葡菌混和菌液中仍然存在大量真菌,并且(MMT/HA-TEC)10组金葡菌混和菌液中的真菌早已几乎被完全杀灭,估算可得,该组的灭菌率小于99%。
高压蒸气杀菌组在经过真菌培养以后,培植出的真菌数量与(MMT/HA-TEC)10组相比稍有降低,并且相较于起始的金葡菌含量(1×108CFU/mL),其灭菌率仍然小于99%。
真菌活死染色可以确切分辨出材料表面的活真菌与死病菌。
培养结束以后,在组表面发觉大量活真菌(绿染)和数目可观的死真菌(红染)。
反观(MMT/HA-TEC)10组,材料表面活真菌和死病菌的数目均远远多于组。
CCK-8实验拿来反应细胞增殖情况,可以看出空白组和(MMT/HA-TEC)10组中的细胞数目均随着时间的下降而降低,经过统计学剖析,两组无统计学意义(P>0.05)。
假放疗组的IL-6浓度为(209.55±8.27)ng/L,IL-10浓度为(210.06±6.46)ng/L,TNF-a浓度为(2.10±0.10)ug/L,该三种增生指标均处在正常范围之内,证明本实验的放疗操作及繁殖过程符合要求,没有发生放疗源性或其他与实验无关的感染。
空白组的增生指标均处在较高水平,与假放疗组相比,差别有统计学意义(P
(MMT/HA-TEC)10组增生指标接近假放疗组,差别无统计学意义(P>0.05)。
小鼠各组炎性指标比较(x±s)
组别
IL-6(ng/L)
IL-10(ng/L)
TNF-α(μg/L)
空白组
15
466.55±15.45
368.90±7.17
7.20±0.52
假放疗组
15
209.55±8.84a
210.06±6.91a
2.10±0.11a
(MMT/HA-TEC)10组
15
211.21±7.81ab
216.10±5.91ab
2.15±0.13ab
1388.748
1450.63
680.387
a:P0.05,与假放疗组比较。
Vonkossa染色是染色矿化团块的精典实验方式,原理是借助氯化银与钙盐的复分解反应产生可被还原的银盐,在强光或紫外光下或则强还原剂作用下使其还原为黄色的金属银。
在本实验中,可以理解为在镜下的黑染区域越多,证明小鼠的成骨疗效越好。
不难发觉,空白组骨组织在镜下几乎不能发觉黑染色的区域,说明空白组的成骨疗效十分不理想。
与之产生鲜明对比的(MMT/HA-TEC)10组和假放疗组,镜下的黑染区域十分显著,成骨疗效良好。
从HE染色结果中我们可以直接发觉空白组中镜下存在大量的炎性细胞(箭头所指),直接证明该组感染严重。
而在(MMT/HA-TEC)10组和假放疗组却基本没有发觉,说明感染被成功控制或未发生感染。

骨内植入物相关感染问题是临床工作中遇到的比较棘手的问题,例如关节置换术后,若是发生玻尿酸相关性感染,将会造成灾难性后果。
目前临床上使用的常规防治或则医治骨内植入物相关感染的方式疗效都不是太好。
材料表面改性是指在不改变材料原有性能的前提下,赋于其表面新的性能,例如抑菌性、疏水性、生物相容性等等。
于是材料表面抑菌镀层应运而生,并且普通的抑菌镀层存在两个问题:其二是药物的控释不可调控,普遍存在“爆释”的现象,即在短时间内大量释放,然后只能控释出极少量的抗生素,远远达不到灭菌的有效含量。
此外,镀层早期灭菌后,遗留的真菌尸体会残留在材料或镀层表面,影响抑菌疗效,有研究表明,死真菌会参与真菌生物膜的建立过程,进一步降低抗感染的难度。
骨内植入物相关感染的主要致病菌主要是金葡菌,感染发生后,会释放大量分泌大量透明质酸酶(HAS)。
本研究在组装多层膜的过程中,采用波谱椭圆偏振光法全程跟踪多层膜的长度变化,结果显示,长度的下降呈现出线性下降的趋势,证明该组装方案可以实现多层膜的成功制备。
抗菌环的大小在一定程度上可以反映出多层膜的药物控释情况,药物控释的越多,则产生的抗菌环越大。
对比曝晒在生理盐水中,随着透明质酸酶含量的降低,抗菌环的大小也骤然降低。
类似的,随着金葡菌含量的降低,抗菌环的大小同样骤然降低。
我们可以得出推论,当无病菌感染时,(MMT/HA-TEC)10多层膜结构可以比较好的保存药物,防止毋须要的控释,当发生真菌感染后,多层膜可以按照真菌的数目和含量,按需控释不同剂量的药物。
真菌含量越大,控释的药物越多,可以实现药物的精准调控。
本研究通过检测浊度率和细胞外蛋白质浓度监测初步探求(MMT/HA-TEC)10多层膜结构对真菌细胞膜私密性的影响。
结果表明(MMT/HA-TEC)10多层膜提取液对金葡菌细胞膜有显著的损害作用,会降低细胞膜的私密性。
但是我们对(MMT/HA-TEC)10多层膜进行了抑菌稳定性检查,经过测试,发觉在经过高压蒸气杀菌并储存14天后,其灭菌率仍然小于99%,证明该镀层具备较好的稳定性。
实验进一步通过真菌活死染色实验阐述镀层表面真菌黏附情况:空白玻璃爬片的表面会出现大量活真菌和死真菌,活真菌是由于真菌的饲养不受控制,而死真菌会沉积附着在材料表面。
而对于(MMT/HA-TEC)10多层膜,因为代考兰宁的灭菌作用,在材料表面几乎找不到红色的活真菌,并且死病菌的数目也极少,这可能是由于发生真菌感染时,真菌分泌的透明质酸酶会分解(MMT/HA-TEC)10多层膜中的透明质酸,进而使得(MMT/HA-TEC)10多层膜表面发生部份崩解,多层膜碎片连同死真菌从材料表面“剥离”,尽可能地防止死真菌继续附着在材料表面。
CCK-8实验反映出(MMT/HA-TEC)10多层膜具有良好的生物相容性。
植物实验结果显示在小鼠体内细胞膜损伤细胞膜损伤,(MMT/HA-TEC)10多层膜抑菌镀层仍然具有优异的灭菌疗效且没有发觉其有影响成骨现象。
综上所述,本研究结果表明,(MMT/HA-TEC)10镀层具有优异的抑菌性能,但是可以按照真菌感染情况,精准控释药物,做到“智能”缓释,并具有良好的生物相容性。
值得注意的是,抗感染的长效性是抑菌镀层的一个重要指标,将来须要考虑进一步改良该抑菌镀层,使其具备更长效的抑菌活性。
但是本研究只在小鼠体内进行抑菌试验,下一步须要采用更中级的喂奶植物进行验证,以期为骨内植入物术后相关感染的精准预防提供更可靠的理论根据。
