显微镜显微镜显微镜是一种利用化学方式形成物体放大影像的仪器。最早发明于16世纪晚期，至今已有四百多年的历史。如今凸透镜成像五种示意图，它早已成为了一种极为重要的科学仪器，广泛地用于生物、化学、物理、冶金、酿造、医学等各类科研活动，对人类的发展作出了巨大而卓越的贡献。随着现代光电子技术和计算机的高速发展，显微检测技术在上业、国防、科技均得到了广泛应用。显微镜的发展是在对光学的研究基础上发展上去的。我国春秋时的《墨经》和古埃及学者欧几里德的《反射光学》都对光学的研究有所记载，后来经过伽利略、牛顿、惠更斯、菲涅耳、夫琅和费、麦克斯韦、爱因斯坦等科学家的努力，光学已发展成为数学学中一门极为重要的基础学科，产生了严格的物理理论技巧及实验技巧。研究光的一个分支便是光学仪器——显微大概在16世纪末，法国的墨镜商詹森（）和他的妻子把几块镜框放进了一个圆筒中，结果发觉通过圆筒听到附近的物体出奇的大，这就是现今的显微镜和望远镜的前身。英国人安东尼冯列文虎克（k，1632-1723)制造的显微镜让人们大开眼界1673年“小昆虫”的微生物世界佳能E-600显微镜莱卡倒置显微镜一．数值孔径（NA,)是目镜和聚光镜的主要技术参数，分别标刻在目镜和聚光镜的壳体sin(u/2)数值孔径最大值为1.4，这个数值在理论上和技术上都达到了极限n是目镜前透镜与被检物体之间介质的折射率u是孔径角又称镜争执,是目镜光轴上的物体点与目镜前透镜的有效半径所产生的角度二．码率()码率又称“鉴别率”，“解像力”。
是评判显微镜性能的又一个重要技术参数。d=λ/NA=λ/[nsin(u/2)要提升帧率，即降低d值（区分距离）,可采取以下举措1．增加波长λ值，使用长波长光源。3．减小孔径角。光学显微镜在使用最长波长的可见光(450nm)作为光源，在油镜下可以达到的最大码率是0.18μm三．放大率放大率就是放大倍数，是指被检验物体经目镜放大再经物镜放大后，人眼所看见的最终图像的大小对原物体大小的比值，是目镜和物镜放大倍数的乘积。放大率也是显微镜的重要参数，但也不能盲目相信放大率越高越好，在选择时应首先考虑目镜的数值孔径。在考虑其总放大倍率的同时，首先应选定所用目镜的放大倍数，其次才考虑物镜的放大倍数。其缘由在于显微镜的成像质量主要取决于目镜的帧率。四．焦深焦深为焦点深度的简称，即在使用显微镜时，当焦点对准某一物体时，除了坐落该点平面上的各点都可以认清楚，但是在此平面的上下一定长度内，也能看得清楚，这个清楚部份的长度就是焦深。焦民大,可以看见被检物体的全层，而焦深小，则只能看见被检物体的一薄层，焦深与其他技术参数有以下关系：1．焦深与总放大倍数及目镜的数值孔径成正比。2．焦厦大，帧率增加。五．视场半径（）视场半径称作视场长度，是指在显微镜下看见的方形视场内所能容纳被检物体的实际范围。
视场半径愈大，愈以便观察。视场数（,缩写为FN），标刻在物镜的物镜两侧。F=FN/Mob视场半径，FN：视场数，Mob:目镜放大率六．覆盖差显微镜的光学系统也包括盖玻片在内。因为盖玻片的长度不标准，光线从盖玻片步入空气形成折射后的光路发生了改变，因而形成了相差，这就是覆盖差。覆盖差的形成影响了显微镜的成响质国际上规定，盖玻片的标准长度为0.17mm,许可范围在0.16—0.18mm,在目镜的制造上已将此长度范围的相差估算在内。目镜壳体上标科的确0.17,即表明该目镜要求盖玻片的长度。七．工作距离工作距离也叫物距，即指目镜前透镜的表面到被检物体之间的距离。镜检时，被检物体应处于目镜的一倍到二倍焦距之间。平常习惯所说的变焦，实际上是调节工作距离。在目镜数值孔径一定的情况下，工作距离短孔数值孔径大的高倍目镜凸透镜成像五种示意图，其工作距离小。八、镜像照度和视场色温镜像照度（-）是显微镜的图象照度的简称，指在显微镜下观察到的景物的疏密程度。视场色温是指显微镜下整个视场的疏密程度，和镜像色温是两个不同的概念。视场色温除了与物镜、物镜有关，它还直接遭到聚光镜、光阑和光源等诱因的影响。
在不更换目镜和物镜的情况下，视场色温大，镜像色温也大。在观察和显微摄影时，更重要的是镜像照度。镜头的外表面上通常均标有各类光学参数，例如某目镜外标有“10/0.25”和“160/0.17”，它表示该目镜的放大倍数为10，数值孔径是0.25，机械筒长为160mm，要求的盖玻片长度为0.17mm。波长对码率的影响示意图浸入油与玻璃的折射率相仿浸入油与玻璃的折射率相仿好多原先因为在透镜及载片表面的反射和折射而损失的光线可以步入目镜，使照明色温提升，改善观察疗效。普通显微镜结构示意图普通光学显微镜将两个凸透镜系统适当地组合在仪器上对标本进行放大，经目镜产生倒立虚像，经物镜放大成实像。显微样品制备之光学显微镜制样光学显微镜制样活体观察染色观察美蓝染色简单染色鉴定染色革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色特性：防止染色对细胞结构的破坏，用于运动性、摄食特点、生长繁育过程中形态变化等观察悬滴法：盖玻片滴一滴菌悬液，反转放在特制凹载玻片直接观察菌丝埋片法：无菌小玻璃纸铺平板表面，涂胶孢子悬液，培养后，取下玻璃纸放在载玻片，观察光学显微镜样品制备－－活体观察酵母水浸片法录象（1:29）活体观察难看到微生物的细致形态和结构，需染色观察。
染色前须要对样品固定，目的：杀害真菌使菌体粘附在玻片上；还可降低对颜料的亲和力。常用酒精火焰加热和物理固定两种方式光学显微样品制备－－染色观察e..12a-c革兰氏染色及镜检录像（5:24）大肠球菌革兰氏染色枯草球菌革兰氏染色革兰氏染色(链球菌、杆菌、螺旋菌)取送显微镜时一定要一手紧握弯臂，另一手托住基座，轻拿轻放。保持显微镜的干燥、清洁，防止污垢、水及物理试剂的亵渎。显微镜的光学部份只能用特殊的擦镜纸与擦镜液一齐擦洗，不能乱用他物擦洗，更不能用右手触摸透镜，以免尿液亵渎透镜。切勿口吹手抹或用布擦。机械部份用布擦洗。70%二氯甲烷，将不同的镜头单独分开放置干燥剂器皿中，最好用棉花棒，纱布，厚实的毛刷等比较厚实的东西来轻轻擦洗。油镜用后应清洗。暗视野显微镜（暗视野显微镜（））活真菌在普通显微镜下是透明，观察不清，采用暗视野显微镜观察。
暗视野显微镜暗视野显微镜特殊聚光器实现斜射照明，给样品照明的光线不直接穿过目镜，而经样品反射或折射后步入目镜，使样品与背景差异大，可以清楚看见透明微小颗粒。用于：生活真菌运动性观察。暗视野显微镜的使用录象（2:17）暗视野显微镜下惨白密螺旋体相差显微镜相差显微镜光线透过透明标本，波长（颜色）和振幅（照度）没有多大变化，用普通显微镜观察透明标本，其形态和内部结构无法辨别。细胞各部份折射率和长度不同，当光线通过时，直射光和衍射光光程有差异，而人眼看不到，并且可通过相差显微镜见到。相差显微镜采用特殊光学装置：环状光阑和相差板，借助光的干涉，将光的相位差转变为人眼可见的振幅差（疏密），使能不染色而见到活细胞及细胞内的个别显微结构。其发明人F.因而获1953年诺贝尔化学奖。相差显微镜（相差显微镜（））1.环型光阑：使透过聚光器的光线产生空心光锥，焦聚到标本上。2.相位板：将直射光或衍射光的相位延后1/4λ。3.合轴调节望远镜：调节环状光阑的像与相板共轭面完全吻合。
4.红色滤光片：缩小照明光线波长范围，降低因为照明光线的波长不同造成的相位变化。相差显微镜的使用相差显微镜的使用1.相差显微镜的装置取下普通显微镜的聚光器，换上带有环状光相的转盘聚光器，并将标识孔指"0"(即明视野);取下普通目镜，装上相差目镜。2.变焦和调光用普通低倍目镜在明视野中观察，当发觉目标后，把观察的目的物移到视野的中央，换上相应的环状光栏，比如l0X相差物镜用l0X标识孔的光栏，并充分开大孔径光栏。中心调节（合轴调节）拨出物镜，插入中心望远镜，用右手固定其外筒，一边眼看望远镜，一边用手指转动望远镜内筒使其升降，对准焦点后才能看见环状光栏的亮环和相板的黑环。此时可将望远镜固定，微微转动聚光器外侧的调节钮，使二者完全重合。假如亮环和黑环大小一不致，可升降聚光器便之一致，换用不同目镜要同时更换相对应的环状光栏，并重新合轴。相差显微镜的使用录象（3:20）一种介壳虫的染色体草履虫微管呈红色、微丝绿色、核黑色萤光显微镜萤光显微镜借助一定波长的迸发光对样品进行迸发，使之形成一定波长的萤光，因而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检查。
在免疫学和分子生物学应用广泛。佳能E800萤光DIC显微镜萤光显微镜和普通显微镜有以下的区别：1.照明形式一般为落射式，即光源通过目镜投射于样品上；2.光源为紫外光，波长较短，区分力低于普通显微镜；3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，物镜和目镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。落射式照明原理优点：能进行多重染色用途：发萤光量的测定对物质定性、定量剖析萤光显微镜萤光显微镜铜绿假单胞菌和蜡样芽孢球菌球状真菌萤光抗原染色的大肠球菌共聚焦显微镜共聚焦显微镜（（))借助萤光显微镜可以对样品发出的萤光进行观察和分并且萤光显微镜搜集到的是样品的整体萤光,来自样品内不同部位的萤光讯号互相干扰,无法分辨,未能获得确切的定位和定量信息。共聚焦显微技术的出现挺好地解决了这一问题,这一技术可以获取细胞内某个薄层面上的萤光信息,外的讯号被清除掉,成像清晰程度大大提升。激光共聚焦扫描显微境LCSM（laser)借助激光作为迸发光源,将激光聚焦于样品中的某一点,这样只有该点附近的区域有萤光,其他没有被迸发的部位没有萤光,一区域发出的萤光反射到光电倍增管,在光电倍增管前设有一个计算机控制的可调节针眼,保证只有被迸发点发出的萤光能够到达光电管,而附近其他点所发出的萤光被挡在视野之外。
照明针孔与侦测针眼对被照射点或被侦测点来说是共轭的，因而被侦测点即为共焦点，被侦测点所在的平面即为共焦平面。采用计算机控制激光和针眼,对细胞内的某一层面进行扫描,可以获得清晰的二维图象。因为激光束的波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的辨别力。获得样品不同深度层次的图象信息都储于计算机内，通过计算机剖析和模拟，才能显示细胞样品的立体结构。共聚焦显微镜共聚焦显微镜（（))